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pet载体有哪些

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请问它是具体如何工作的 ...

为什么pet载体a不需要加保护碱基?: 保护性碱基是加在pcr产物上的,怕的是识别位点太靠边了,内切酶识别太困难,所以很难切。而在载体上的内切酶位点两边都有碱基,识别较为方便,不需要加保护性碱基。
理论上保护性碱基可以随便加上几个(乱加的至少6个以上,当然合成引物就要贵一点,也要注意不能加成甲基化位点),把位点移到中间点就行。

以PET32为载体表达蛋白大小是多少: 理论上影响是比较大的,原核LB培养不加抗生素的话,很容易出现丢失了带有外源基因质粒的生长速度比目的菌的生长速度快得多的情况。最后的结果就是影响目的蛋白的表达量。 所以如果这个蛋白表达培养的实验是第一次做的话,建议重做一遍以保证数据的准确。如果不是第一次做的话,可以对比下之前的表达数据验证下是否有影响。pet30a载体表达的蛋白分子量增大多少kda 加上前面的融合肽以及终止子之前翻译的一个肽段,最终表达的蛋白分子量是59KD左右 加上前面的融合肽以及终止子之前翻译的一个肽段,最终表达的蛋白分子量是59KD左右

pet32a载体设计引物用考虑移码突变么: 不是融合蛋白不需要考虑移码突变~融合蛋白后一个蛋白容易产生移码~

关于共表达载体pETDuet的工作原理: 把不同基因插入同一个复制子下面?

请问现在原核表达质粒载体(比如PET载体)的价位大约是多少?可以去那些公司购买呢?: 第一个,你可以找一找你的师兄弟有没有,再找一找同学有没有?如果有的话就省了这笔钱。
或者用你们手头现有的质粒去换。
如果没有,可以找一些国内的公司去买,因为一些不好明说的原因,国内一些公司也有一些。这样会便宜一些。
如果放心不下,那就如楼上说的,去Merck/Novagen公司购买,当然这价格就高一些,估计在几千块钱吧,不同质粒价格不一样。

目的片段与表达PET-30a载体连接后转化总是不长菌怎么回事?: 有没有做对照?
它是卡那抗性的,有没有弄错?(我经常错在这里~O(∩_∩)O~)
如果没有弄错,那就需要改动连接体系,载体和片段的数量比在1:5-1:10之间,片段越小就多加点。还有一个就是感受态效率,做连接的感受态效率要在10^6以上。
当然,你想想操作过程当中有没有错误,有时候涂板的耙子温度太高了,菌液离酒精灯太近了,都会烫死细菌的。

为什么要进行亚克隆?一个基因已经克隆到T载体上了,想表达它,为什么还要进行亚克隆,连到pET40b呢: T载体一般是克隆载体,需要克隆到表达载体,用相应的启动子启动表达

如何用pET30a+ 构建载体: 以前合过相应的引物,不过是针对pET30a的,5'端用的是BamH1 3'端用的是Xho1
现在要更换载体用pET28a ,突然发现以前师兄合的引物有些问题.
要插入的基因长度是684bp.基因的读码框正确, 但师兄在设计引物时,并没有扩增全长,而是扩增了683bp,即在基因的3'端下游的最末端少扩增了一个碱基,这样一来,插入基因的长度就成了3X+2 的形式,

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